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造成阳性样本漏检的可能原因有哪些?

2016-07-07 16:15来源:湖南圣湘生物

实时荧光定量PCR扩增曲线包括基线期,指数扩增期,线性扩增期和扩增平台期,标准的曲线应该呈典型的S型。不规则曲线可以根据曲线的具体情况来分析:1)曲线呈斜线上升原因:热盖失灵或热盖没盖紧,导致控温不准、液体挥发。解决办法:更换仪器热盖或将热盖盖紧。图1 曲线呈斜线上升2)扩增曲线分成两段(断裂)图2扩增曲线分成两段(断裂)原因:基线的终点大于Ct值,通常是因为模板DNA浓度偏高,CT值< 15,而基线仍然取3-15,其中包含部分扩增信号,导致曲线被压下去。解决方法:减小基线终点,至Ct值前4个循环,重新分析数据。3)直线扩增曲线图3 某些样本出现直线扩增曲线原因:探针部分降解解决办法:建议更换试剂进行测试。4)曲线平台期下掉原因:盖子没盖紧解决办法:PCR反应管盖子盖上后,检查盖子是否盖紧。图4 曲线平台期下掉

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